Articles

væsentlige tekniske tip til STAP-cellekonverteringskultur fra somatiske celler

Posted by admin

forfatterne trækker denne PROTOKOLUDVEKSLINGSPROTOKOL tilbage, fordi de papirer, som den er baseret på, er trukket tilbage.

Stimulus-udløst erhvervelse af pluripotency (STAP) er et cellulært omprogrammeringsfænomen, der for nylig blev rapporteret i to papirer (Obokata, Nature,2014A, b). I denne omprogrammeringsproces omdannes neonatale somatiske celler ved stærke eksterne stimuli til celler, der udtrykker pluripotensrelaterede gener, såsom Oct3/4, og erhverver evnen til at differentiere til derivater af alle tre kimlag in vitro og in vivo. Disse celler, betegnet STAP-celler, kan bidrage til kimære fostre efter blastocystinjektion. Desuden findes injicerede STAP-celler i blastocystinjektionsanalysen også i ekstra-embryonale væv, såsom placenta.

STAP-celler afledt af neonatale somatiske celler omprogrammeres således fuldt ud til tilstanden af pluripotens. Under betingelserne for etablering af STAP-celler er deres proliferative kapacitet ret begrænset, forskellig fra embryonale stamceller (ESC ‘ er). STAP-celler kan yderligere omdannes til to typer proliferative cellelinjer: STAP-stamceller og FGF4-inducerede stamceller (FI-stamceller). STAP stamceller, der omdannes fra STAP celler i ACTH-holdigt medium (se Procedure), mister evnen til at bidrage til ekstra-embryonale væv. FI-stamceller, der genereres fra STAP-celler i fgf4-holdigt medium, bevarer derimod evnen til at bidrage til både embryonale og ekstraembryonale slægter i blastocystinjektionsanalyse, skønt deres embryonale bidrag er relativt lavt.

STAP-fænomenet induceret af eksterne stimuli kaster således potentielt nyt lys over vores forståelse af pluripotens og differentiering i pattedyrceller. Dette uforudsete fænomen kan udløses i neonatale hæmatopoietiske celler, for eksempel ved forbigående eksponering for lav-pH-opløsning. På trods af sin tilsyneladende enkelhed kræver denne procedure særlig pleje i cellehåndtering og kulturforhold såvel som i valget af startcellepopulationen. Levering af det optimale niveau af subletal stress til celler er afgørende for processen med STAP-celleinduktion. Fra vores erfaring ses STAP-konvertering reproducerbart med dyrkningsbetingelser, hvor de fleste celler overlever i en dag efter lav-pH-behandling, og hvor op til 80% af det oprindelige celletal efterfølgende dør omkring dag 2-3. Kontrol af opløsningens pH er ikke den eneste nøglefaktor; den forsinkede indtræden af subletal stress er også kritisk vigtig. Denne biologiske kontekst kan også påvirkes af mange andre faktorer. For eksempel skal somatisk celleforberedelse og cellehåndtering før og efter eksponeringen for stress udføres med omhu, da yderligere skade på cellerne kan ændre stressniveauet og forårsage overdreven celledød eller utilstrækkelig udløsning. De typer celler, der anvendes til STAP-konvertering, er også kritiske, og brugen af celler fra andre kilder (f.eks. brugen af dyrkede fibroblaster efter passage) kan også resultere i en manglende opnåelse af STAP-konvertering. Vi har reproducerbart observeret STAP cellekonvertering, når korrekte procedurer følges i den rigtige rækkefølge.

for at lette den brede test og brug af denne teknik forbereder vi nu en fuld protokolartikel med trinvise instruktioner. Da forberedelse, indsendelse og offentliggørelse af et fuldt manuskript tager en betydelig mængde tid, vil vi dog gerne dele en række tekniske tip til STAP-cellekonverteringskultur (og relaterede eksperimenter) i denne Protokoludveksling. Vi håber, at disse tekniske tip kan besvare mange spørgsmål, der ofte stilles om de eksperimentelle detaljer.

nøgleord
STAP-celler, omprogrammering, pluripotency

Related Post

Leave A Comment