Articles

viktiga tekniska tips för STAP-cellkonverteringskultur från somatiska celler

Posted by admin

författarna drar tillbaka detta PROTOKOLLUTBYTESPROTOKOLL eftersom de papper som det bygger på har dragits tillbaka.

Stimulus-trigged acquisition of pluripotency (STAP) är ett cellulärt omprogrammeringsfenomen som nyligen rapporterades i två artiklar (Obokata, Nature, 2014A,b). I denna omprogrammeringsprocess omvandlas neonatala somatiska celler vid starka yttre stimuli till celler som uttrycker pluripotensrelaterade gener, såsom Oct3/4, och förvärvar förmågan att differentiera till derivat av alla tre bakterielagren in vitro och in vivo. Dessa celler, benämnda STAP-celler, kan bidra till chimära Foster efter blastocystinjektion. I blastocystinjektionsanalysen finns dessutom injicerade STAP-celler i extra-embryonala vävnader, såsom placenta.

STAP-celler härledda från neonatala somatiska celler omprogrammeras således fullständigt till som pluripotenstillstånd. Under förutsättningarna för etablering av STAP-celler är deras proliferativa kapacitet ganska begränsad, skiljer sig från embryonala stamceller (Esc). STAP-celler kan vidare omvandlas till två typer av proliferativa cellinjer: STAP-stamceller och fgf4-inducerade stamceller (FI-stamceller). STAP-stamceller, som omvandlas från STAP-celler i ACTH-innehållande medium (se procedur), förlorar förmågan att bidra till extra-embryonala vävnader. FI-stamceller, som genereras från STAP-celler i fgf4-innehållande medium, behåller däremot förmågan att bidra till både embryonala och extra-embryonala linjer i blastocystinjektionsanalys, även om deras embryonala bidrag är relativt lågt.

STAP-fenomenet som induceras av yttre stimuli, kastar således potentiellt nytt ljus på vår förståelse av pluripotens och differentiering i däggdjursceller. Detta oförutsedda fenomen kan utlösas i neonatala hematopoietiska celler, till exempel genom övergående exponering för låg pH-lösning. Trots sin skenbara enkelhet kräver denna procedur särskild vård vid cellhantering och odlingsförhållanden, liksom vid valet av startcellpopulationen. Leveransen av den optimala nivån av subletal stress till celler är avgörande för processen för STAP-cellinduktion. Från vår erfarenhet ses STAP-omvandling reproducerbart med odlingsförhållanden där de flesta celler överlever en dag efter låg pH-behandling och där upp till 80% av det ursprungliga cellnumret därefter dör på cirka dagar 2-3. Kontroll av lösningens pH är inte den enda nyckelfaktorn; den försenade uppkomsten av subletal stress är också kritiskt viktig. Detta biologiska sammanhang kan också påverkas av många andra faktorer. Till exempel måste somatisk cellberedning och cellhantering före och efter exponering för stress göras med försiktighet, eftersom ytterligare skador på cellerna kan förändra stressnivån, vilket orsakar överdriven celldöd eller otillräcklig utlösning. De typer av celler som används för STAP-omvandling är också kritiska, och användningen av celler från andra källor (t.ex. användningen av odlade fibroblaster efter Passage) kan också leda till ett misslyckande att uppnå STAP-omvandling. Vi har reproducerbart observerat STAP – cellkonvertering när korrekta procedurer följs i rätt ordning.

för att underlätta den breda testningen och användningen av denna teknik förbereder vi nu en fullständig protokollartikel med steg-för-steg-instruktioner. Men eftersom förberedelse, inlämning och publicering av ett fullständigt manuskript tar en betydande tid, vill vi dela ett antal tekniska tips för STAP-cellkonverteringskultur (och relaterade experiment) i detta Protokollutbyte. Vi hoppas att dessa tekniska tips kan svara på många frågor som ofta ställs om experimentella detaljer.

nyckelord
STAPELCELLER, omprogrammering, pluripotens

Related Post

Leave A Comment