Articles

sfaturi tehnice esențiale pentru cultura de conversie a celulelor STAP din celule somatice

Posted by admin

autorii retrag acest PROTOCOL de schimb de PROTOCOL, deoarece lucrările pe care se bazează au fost retrase.

achiziția pluripotenței declanșată de stimuli (STAP) este un fenomen de reprogramare celulară care a fost raportat recent în două lucrări (Obokata, Nature, 2014a,b). În acest proces de reprogramare, la stimuli externi puternici, celulele somatice neonatale sunt transformate în celule care exprimă gene legate de pluripotență, cum ar fi Oct3/4, și dobândesc capacitatea de a se diferenția în derivați ai tuturor celor trei straturi germinale in vitro și in vivo. Aceste celule, denumite celule STAP, pot contribui la fetușii himerici după injectarea blastocistului. Mai mult, în testul de injecție cu blastocist, celulele stap injectate se găsesc și în țesuturile extra-embrionare, cum ar fi placenta.

celulele STAP derivate din celulele somatice neonatale sunt astfel reprogramate complet ca stare de pluripotență. În condițiile de stabilire a celulelor STAP, capacitatea lor proliferativă este destul de limitată, distinctă de cea a celulelor stem embrionare (ces). Celulele STAP pot fi transformate în continuare în două tipuri de linii celulare proliferative: celule stem STAP și celule stem induse de FGF4 (celule stem FI). Celulele stem STAP, care sunt transformate din celule STAP în mediu care conține ACTH (vezi procedura), pierd capacitatea de a contribui la țesuturile extra-embrionare. Celulele stem FI, care sunt generate din celulele STAP în mediul care conține FGF4, păstrează, în schimb, capacitatea de a contribui atât la liniile embrionare, cât și la cele extra-embrionare în testul de injecție cu blastocist, deși contribuția lor embrionară este relativ scăzută.

fenomenul STAP indus de stimuli externi, astfel, potențial aruncă o nouă lumină asupra înțelegerii noastre a pluripotenței și diferențierii în celulele mamiferelor. Acest fenomen neprevăzut poate fi declanșat în celulele hematopoietice neonatale, de exemplu, prin expunerea tranzitorie la soluția cu pH scăzut. În ciuda simplității sale aparente, această procedură necesită o atenție deosebită în condițiile de manipulare și cultură a celulelor, precum și în alegerea populației celulare inițiale. Livrarea nivelului optim de stres subletal către celule este esențială pentru procesul de inducție a celulelor STAP. Din experiența noastră, conversia STAP este observată reproductibil cu condiții de cultură în care majoritatea celulelor supraviețuiesc o zi după tratamentul cu pH scăzut și în care până la 80% din numărul inițial de celule mor ulterior în jurul zilelor 2-3. Controlul pH-ului soluției nu este singurul factor cheie; debutul întârziat al stresului subletal este, de asemenea, extrem de important. Acest context biologic poate fi afectat și de mulți alți factori. De exemplu, pregătirea celulelor somatice și manipularea celulelor înainte și după expunerea la stres trebuie făcute cu grijă, deoarece deteriorarea suplimentară a celulelor poate modifica nivelul de stres, provocând moartea excesivă a celulelor sau declanșarea insuficientă. Tipurile de celule utilizate pentru Conversia STAP sunt, de asemenea, Critice, iar utilizarea celulelor din alte surse (de exemplu, utilizarea fibroblastelor cultivate după trecere) poate duce, de asemenea, la eșecul realizării conversiei STAP. Am observat reproductibil conversia celulelor STAP atunci când procedurile adecvate sunt urmate în ordinea corectă.

pentru a facilita testarea largă și utilizarea acestei tehnici, pregătim acum un articol complet de protocol cu instrucțiuni pas cu pas. Cu toate acestea, deoarece pregătirea, prezentarea și publicarea unui manuscris complet durează o perioadă semnificativă de timp, am dori să împărtășim o serie de sfaturi tehnice pentru cultura de conversie a celulelor STAP (și experimente conexe) în acest schimb de Protocol. Sperăm că aceste sfaturi tehnice pot răspunde la multe întrebări frecvente despre detaliile experimentale.

cuvinte cheie
celule STAP, reprogramare, pluripotență

Related Post

Leave A Comment