Articles

Dicas técnicas essenciais para cultura de conversão de células STAP de células somáticas

Posted by admin

os autores estão retraindo este protocolo de troca de Protocolo porque os artigos sobre os quais se baseia foram retraídos.

aquisição de pluripotência desencadeada por estímulo (STAP) é um fenômeno de reprogramação celular que foi recentemente relatado em dois artigos (Obokata, Nature, 2014A,b). Nesse processo de reprogramação, mediante fortes estímulos externos, as células somáticas neonatais são convertidas em células que expressam genes relacionados à pluripotência, como Oct3/4, e adquirem a capacidade de se diferenciar em derivados de todas as três camadas germinativas in vitro e in vivo. Essas células, denominadas células STAP, podem contribuir para fetos quiméricos após a injeção de blastocisto. Além disso, no ensaio de injeção de blastocisto, as células stap injetadas também são encontradas em tecidos extra-embrionários, como a placenta.

as células STAP derivadas de células somáticas neonatais são, portanto, totalmente reprogramadas para como estado de pluripotência. Nas condições para o estabelecimento de células STAP, sua capacidade proliferativa é bastante limitada, distinta da das células-tronco embrionárias (ESCs). As células STAP podem ser convertidas em dois tipos de linhas celulares proliferativas: células-tronco stap e células-tronco induzidas por FGF4 (células-tronco FI). As células estaminais STAP, que são convertidas a partir de células STAP em meio contendo ACTH (ver procedimento), perdem a capacidade de contribuir para tecidos extra-embrionários. As células-tronco de FI, que são geradas a partir de células STAP em meio contendo FGF4, em contraste, retêm a capacidade de contribuir para linhagens embrionárias e extra-embrionárias no ensaio de injeção de blastocisto, embora sua contribuição embrionária seja relativamente baixa.

o fenômeno STAP induzido por estímulos externos, potencialmente lança nova luz sobre nossa compreensão da pluripotência e diferenciação em células de mamíferos. Esse fenômeno imprevisto pode ser desencadeado em células hematopoiéticas neonatais, por exemplo, por exposição transitória a solução de baixo pH. Apesar de sua aparente simplicidade, esse procedimento requer cuidados especiais no manuseio celular e nas condições de cultura, bem como na escolha da população celular inicial. A entrega do nível ótimo de estresse subletal às células é essencial para o processo de indução de células STAP. A partir de nossa experiência, a conversão de STAP é vista de forma reproduzível com condições de cultura em que a maioria das células sobrevive por um dia após o tratamento com pH baixo e em que até 80% do número de células inicial morre posteriormente em torno dos dias 2-3. O controle do pH da solução não é o único fator-chave; o início tardio do estresse subletal também é criticamente importante. Esse contexto biológico também pode ser afetado por muitos outros fatores. Por exemplo, a preparação celular somática e o manuseio celular antes e depois da exposição ao estresse devem ser feitos com cuidado, pois danos adicionais às células podem alterar o nível de estresse, causando morte celular excessiva ou desencadeamento insuficiente. Os tipos de células usadas para conversão de STAP também são críticos, e o uso de células de outras fontes (por exemplo, o uso de fibroblastos cultivados após a passagem) também pode resultar em uma falha na obtenção da conversão de STAP. Observamos reprodutivelmente a conversão de células STAP quando procedimentos adequados são seguidos na sequência correta.

para facilitar o amplo teste e uso dessa técnica, agora estamos preparando um artigo de protocolo completo com instruções passo a passo. No entanto, como a preparação, submissão e publicação de um manuscrito completo leva uma quantidade significativa de tempo, gostaríamos de compartilhar uma série de dicas técnicas para a cultura de conversão de células STAP (e experimentos relacionados) nesta troca de Protocolo. Esperamos que essas dicas técnicas possam responder a muitas perguntas frequentes sobre os detalhes experimentais.

palavras-chave
células STAP, reprogramação, pluripotência

Related Post

Leave A Comment