the AUTHORS ARE RETRACTING THIS PROTOCOL EXCHANGE PROTOCOL BECAUSE the PAPERS on which it IS BASED HAVE BEEN RETRACTED.

stimulus-Trigger acquisition of pluripotency (STAP) jest zjawiskiem reprogramowania komórkowego, które zostało niedawno zgłoszone w dwóch artykułach (Obojata, Nature,2014a, b). W tym procesie przeprogramowywania, pod wpływem silnych bodźców zewnętrznych, noworodkowe komórki somatyczne są przekształcane w komórki, które wyrażają geny związane z pluripotencją, takie jak Oct3 / 4, i nabywają zdolność do różnicowania się w pochodne wszystkich trzech warstw zarodkowych in vitro i In vivo. Komórki te, zwane komórkami STAP, mogą przyczynić się do chimerycznych płodów po wstrzyknięciu blastocysty. Ponadto, w teście wstrzyknięcia blastocysty, wstrzyknięte komórki STAP znajdują się również w tkankach pozamałżeńskich, takich jak łożysko.

komórki STAP pochodzące z noworodkowych komórek somatycznych są więc w pełni przeprogramowane do stanu pluripotencji. W Warunkach tworzenia komórek STAP ich zdolność proliferacyjna jest dość ograniczona, w odróżnieniu od embrionalnych komórek macierzystych (ESC). Komórki STAP mogą być dalej przekształcane w dwa rodzaje proliferacyjnych linii komórkowych: komórki macierzyste stap i indukowane FGF4 komórki macierzyste (komórki macierzyste FI). Stap komórki macierzyste, które są przekształcane z komórek STAP w środowisku zawierającym ACTH (patrz procedura), tracą zdolność do przyczyniania się do tkanek pozamałżeńskich. Komórki macierzyste FI, które są generowane z komórek STAP w pożywce zawierającej FGF4, w przeciwieństwie do tego zachowują zdolność do udziału zarówno w linii zarodkowej, jak i pozamałżeńskiej w teście wstrzykiwania blastocysty, chociaż ich udział w zarodku jest stosunkowo niski.

zjawisko STAP indukowane przez bodźce zewnętrzne, potencjalnie rzuca nowe światło na nasze rozumienie pluripotencji i różnicowania w komórkach ssaków. To nieprzewidziane zjawisko może być wywołane w komórkach krwiotwórczych noworodków, na przykład przez przejściową ekspozycję na roztwór o niskim pH. Pomimo pozornej prostoty procedura ta wymaga szczególnej ostrożności w zakresie obsługi komórek i warunków hodowli, a także w wyborze populacji komórek wyjściowych. Dostarczanie optymalnego poziomu stresu subletalnego do komórek jest niezbędne do procesu indukcji komórek STAP. Z naszego doświadczenia wynika, że konwersja STAP jest odtwarzalna w warunkach hodowli, w których większość komórek przeżywa jeden dzień po leczeniu o niskim pH i w których do 80% początkowej liczby komórek umiera następnie w dniach 2-3. Kontrola pH roztworu nie jest jedynym kluczowym czynnikiem; opóźniony początek stresu subletalnego jest również niezwykle ważny. Na ten kontekst biologiczny może mieć również wpływ wiele innych czynników. Na przykład przygotowanie komórek somatycznych i obsługa komórek przed i po ekspozycji na stres muszą być wykonane z ostrożnością, ponieważ dodatkowe uszkodzenie komórek może zmienić poziom stresu, powodując nadmierną śmierć komórek lub niewystarczające wyzwalanie. Typy komórek używanych do konwersji STAP są również krytyczne, a wykorzystanie komórek z innych źródeł (np. zastosowanie hodowanych fibroblastów po przejściu) może również spowodować niepowodzenie w osiągnięciu konwersji STAP. Odtwarzalnie zaobserwowaliśmy konwersję komórek STAP, gdy właściwe procedury są przestrzegane w odpowiedniej kolejności.

aby ułatwić szerokie Testowanie i stosowanie tej techniki, przygotowujemy teraz pełny artykuł protokołu z instrukcjami krok po kroku. Jednakże, ponieważ przygotowanie, przedłożenie i publikacja pełnego manuskryptu zajmuje dużo czasu, chcielibyśmy podzielić się kilkoma wskazówkami technicznymi dotyczącymi hodowli konwersji komórek STAP (i powiązanych eksperymentów) w tej wymianie protokołu. Mamy nadzieję, że te wskazówki techniczne mogą odpowiedzieć na wiele często zadawanych pytań dotyczących szczegółów eksperymentalnych.