Articles

Essential technical tips for stap cell conversion culture from somatic cells

Posted by admin

the AUTHORS ARE RETRACTING THIS PROTOCOL EXCHANGE PROTOCOL BECAUSE the PAPERS on which it IS BASED HAVE BEEN RETRACTED.

stimulus-Trigger acquisition of pluripotency (STAP) jest zjawiskiem reprogramowania komórkowego, które zostało niedawno zgłoszone w dwóch artykułach (Obojata, Nature,2014a, b). W tym procesie przeprogramowywania, pod wpływem silnych bodźców zewnętrznych, noworodkowe komórki somatyczne są przekształcane w komórki, które wyrażają geny związane z pluripotencją, takie jak Oct3 / 4, i nabywają zdolność do różnicowania się w pochodne wszystkich trzech warstw zarodkowych in vitro i In vivo. Komórki te, zwane komórkami STAP, mogą przyczynić się do chimerycznych płodów po wstrzyknięciu blastocysty. Ponadto, w teście wstrzyknięcia blastocysty, wstrzyknięte komórki STAP znajdują się również w tkankach pozamałżeńskich, takich jak łożysko.

komórki STAP pochodzące z noworodkowych komórek somatycznych są więc w pełni przeprogramowane do stanu pluripotencji. W Warunkach tworzenia komórek STAP ich zdolność proliferacyjna jest dość ograniczona, w odróżnieniu od embrionalnych komórek macierzystych (ESC). Komórki STAP mogą być dalej przekształcane w dwa rodzaje proliferacyjnych linii komórkowych: komórki macierzyste stap i indukowane FGF4 komórki macierzyste (komórki macierzyste FI). Stap komórki macierzyste, które są przekształcane z komórek STAP w środowisku zawierającym ACTH (patrz procedura), tracą zdolność do przyczyniania się do tkanek pozamałżeńskich. Komórki macierzyste FI, które są generowane z komórek STAP w pożywce zawierającej FGF4, w przeciwieństwie do tego zachowują zdolność do udziału zarówno w linii zarodkowej, jak i pozamałżeńskiej w teście wstrzykiwania blastocysty, chociaż ich udział w zarodku jest stosunkowo niski.

zjawisko STAP indukowane przez bodźce zewnętrzne, potencjalnie rzuca nowe światło na nasze rozumienie pluripotencji i różnicowania w komórkach ssaków. To nieprzewidziane zjawisko może być wywołane w komórkach krwiotwórczych noworodków, na przykład przez przejściową ekspozycję na roztwór o niskim pH. Pomimo pozornej prostoty procedura ta wymaga szczególnej ostrożności w zakresie obsługi komórek i warunków hodowli, a także w wyborze populacji komórek wyjściowych. Dostarczanie optymalnego poziomu stresu subletalnego do komórek jest niezbędne do procesu indukcji komórek STAP. Z naszego doświadczenia wynika, że konwersja STAP jest odtwarzalna w warunkach hodowli, w których większość komórek przeżywa jeden dzień po leczeniu o niskim pH i w których do 80% początkowej liczby komórek umiera następnie w dniach 2-3. Kontrola pH roztworu nie jest jedynym kluczowym czynnikiem; opóźniony początek stresu subletalnego jest również niezwykle ważny. Na ten kontekst biologiczny może mieć również wpływ wiele innych czynników. Na przykład przygotowanie komórek somatycznych i obsługa komórek przed i po ekspozycji na stres muszą być wykonane z ostrożnością, ponieważ dodatkowe uszkodzenie komórek może zmienić poziom stresu, powodując nadmierną śmierć komórek lub niewystarczające wyzwalanie. Typy komórek używanych do konwersji STAP są również krytyczne, a wykorzystanie komórek z innych źródeł (np. zastosowanie hodowanych fibroblastów po przejściu) może również spowodować niepowodzenie w osiągnięciu konwersji STAP. Odtwarzalnie zaobserwowaliśmy konwersję komórek STAP, gdy właściwe procedury są przestrzegane w odpowiedniej kolejności.

aby ułatwić szerokie Testowanie i stosowanie tej techniki, przygotowujemy teraz pełny artykuł protokołu z instrukcjami krok po kroku. Jednakże, ponieważ przygotowanie, przedłożenie i publikacja pełnego manuskryptu zajmuje dużo czasu, chcielibyśmy podzielić się kilkoma wskazówkami technicznymi dotyczącymi hodowli konwersji komórek STAP (i powiązanych eksperymentów) w tej wymianie protokołu. Mamy nadzieję, że te wskazówki techniczne mogą odpowiedzieć na wiele często zadawanych pytań dotyczących szczegółów eksperymentalnych.

słowa kluczowe
STAP cells, reprogramming, pluripotency

Related Post