Articles

Essential technical tips for STAP cell conversion culture from somatic cells

Posted by admin

de auteurs trekken dit protocol EXCHANGE PROTOCOL in omdat de PAPERS waarop het gebaseerd is zijn ingetrokken.

Stimulus-triggered acquisition of pluripotency (STAP) is een cellulaire herprogrammering fenomeen dat onlangs werd gemeld in twee papers (Obokata, Nature, 2014a,b). In dit het herprogrammeren proces, op sterke externe stimuli, worden de neonatal somatische cellen omgezet in cellen die pluripotency-verwante genen, zoals Oct3/4 uitdrukken, en verwerven de capaciteit om in derivaten van alle drie kiemlagen in vitro en in vivo te onderscheiden. Deze cellen, zogenaamde STAP-cellen, kunnen bijdragen aan chimerische foetussen na blastocyst injectie. Bovendien worden in de blastocyst-injectietest geïnjecteerde STAP-cellen ook aangetroffen in extra-embryonale weefsels, zoals de placenta.

STAP-cellen afgeleid van neonatale somatische cellen worden dus volledig geherprogrammeerd naar pluripotentie. In de omstandigheden voor de oprichting van STAP-cellen is hun proliferatieve capaciteit vrij beperkt, anders dan die van embryonale stamcellen (ESCs). STAP-cellen kunnen verder worden omgezet in twee soorten proliferatieve cellijnen: STAP-stamcellen en FGF4-geïnduceerde stamcellen (FI-stamcellen). STAP-stamcellen, die worden omgezet van STAP-cellen in ACTH-bevattend medium (zie Procedure), verliezen het vermogen om bij te dragen aan extra embryonale weefsels. FI-stamcellen, die worden gegenereerd uit STAP-cellen in FGF4-bevattend medium, behouden daarentegen de capaciteit om bij te dragen aan zowel embryonale als extra-embryonale lijnen in blastocyst-injectietest, hoewel hun embryonale bijdrage relatief laag is.

het door externe stimuli geïnduceerde STAP-fenomeen werpt dus mogelijk een nieuw licht op ons begrip van pluripotentie en differentiatie in zoogdiercellen. Dit onvoorziene fenomeen kan worden veroorzaakt in neonatale hematopoëtische cellen, bijvoorbeeld door tijdelijke blootstelling aan lage pH-oplossing. Ondanks zijn schijnbare eenvoud, vereist deze procedure speciale zorg in celbehandeling en cultuurvoorwaarden, evenals in de keuze van de beginnende celpopulatie. Het leveren van het optimale niveau van subletale stress aan cellen is essentieel voor het proces van stap-celinductie. Uit onze ervaring blijkt dat STAP-conversie reproduceerbaar wordt gezien bij kweekomstandigheden waarbij de meeste cellen één dag overleven na een behandeling met een lage pH, en waarbij maximaal 80% van het initiële celaantal vervolgens sterft op dag 2-3. Controle van de pH van de oplossing is niet de enige belangrijke factor; het vertraagde begin van subletale stress is ook van cruciaal belang. Deze biologische context kan ook door vele andere factoren worden beà nvloed. Bijvoorbeeld, moeten de somatische celvoorbereiding en celbehandeling vóór en na de blootstelling aan spanning met zorg worden gedaan, aangezien extra schade aan de cellen het niveau van spanning kan veranderen, veroorzakend bovenmatige celdood of onvoldoende triggering. De soorten cellen die voor STAP-conversie worden gebruikt, zijn ook cruciaal en het gebruik van cellen uit andere bronnen (bijvoorbeeld het gebruik van gekweekte fibroblasten na het passeren) kan ook leiden tot het niet bereiken van STAP-conversie. We hebben reproduceerbaar STAP-celconversie waargenomen wanneer de juiste procedures in de juiste volgorde worden gevolgd.

om het brede testen en gebruik van deze techniek te vergemakkelijken, bereiden we nu een volledig protocol artikel met stap-voor-stap instructies voor. Omdat de voorbereiding, indiening en publicatie van een volledig manuscript echter veel tijd in beslag neemt, willen we graag een aantal technische tips delen voor de CONVERSIECULTUUR van STAP-cellen (en verwante experimenten) in deze Protocoluitwisseling. We hopen dat deze technische tips veel gestelde vragen over de experimentele details kunnen beantwoorden.

trefwoorden
STAP-cellen, herprogrammering, pluripotentie

Related Post

Leave A Comment