Articles

Essential technical tips For STAP cell conversion culture from somatic cells

Posted by admin

FORFATTERNE TREKKER TILBAKE DENNE PROTOKOLLUTVEKSLINGSPROTOKOLLEN FORDI PAPIRENE SOM DEN ER BASERT PÅ, ER TRUKKET TILBAKE.

Stimulus-utløst oppkjøp av pluripotency (STAP) er et cellulært omprogrammeringsfenomen som nylig ble rapportert i to artikler (Obokata, Nature, 2014A,b). I denne omprogrammeringsprosessen, ved sterke ytre stimuli, blir neonatale somatiske celler omdannet til celler som uttrykker pluripotensrelaterte gener, Som Oct3/4, og oppnår evnen til å differensiere til derivater av alle tre bakterielagene in vitro og in vivo. Disse cellene, kalt STAP celler, kan bidra til kimære foster etter blastocyst injeksjon. Videre, i blastocyst injeksjon analyse, injisert STAP celler er også funnet i ekstra-embryonale vev, slik som placenta.

STAP-celler avledet fra neonatale somatiske celler blir dermed fullstendig omprogrammert til en tilstand av pluripotens. Under betingelsene for etablering AV STAP-celler er deres proliferative kapasitet ganske begrenset, forskjellig fra embryonale stamceller (ESCs). STAP-celler kan videre omdannes til to typer proliferative cellelinjer: STAP stamceller og FGF4-induserte stamceller (FI stamceller). STAP stamceller, som omdannes fra STAP-celler I ACTH-inneholdende medium (Se Prosedyre), mister evnen til å bidra til ekstra-embryonale vev. FI stamceller, som genereres fra STAP-celler i FGF4-inneholdende medium, beholder i motsetning kapasiteten til å bidra til både embryonale og ekstra-embryonale linjer i blastocyst injeksjonstest, selv om deres embryonale bidrag er relativt lavt.

STAP-fenomenet indusert av ytre stimuli, og dermed potensielt kaster nytt lys på vår forståelse av pluripotency og differensiering i pattedyrceller. Dette uforutsette fenomenet kan utløses i neonatale hematopoietiske celler, for eksempel ved forbigående eksponering for lav pH-oppløsning. Til tross for sin tilsynelatende enkelhet, krever denne prosedyren spesiell omsorg i cellehåndtering og kulturforhold, samt i valg av startcellepopulasjonen. Levering av det optimale nivået av subletal stress til celler er avgjørende for PROSESSEN MED STAPCELLEINDUKSJON. FRA vår erfaring er stap-konvertering reproduserbart sett med kulturforhold der de fleste celler overlever i en dag etter lav pH-behandling, og hvor opptil 80% av det første celletallet dør senere på rundt dager 2-3. Kontroll av ph i løsningen er ikke den eneste nøkkelfaktoren; den forsinkede starten av sublethal stress er også kritisk viktig. Denne biologiske konteksten kan også påvirkes av mange andre faktorer. For eksempel må somatisk cellepreparasjon og cellehåndtering før og etter eksponering for stress gjøres med forsiktighet, da ytterligere skade på cellene kan endre nivået av stress, forårsaker overdreven celledød eller utilstrekkelig utløsing. Celletypene som brukes til STAP-konvertering er også kritiske, og bruk av celler fra andre kilder (f. eks. bruk av dyrkede fibroblaster etter passaging) kan også føre til manglende OPPNÅ STAP-konvertering. Vi har reproduserbart observert STAPCELLEKONVERTERING når riktige prosedyrer følges i riktig rekkefølge.

for å lette bred testing og bruk av denne teknikken, forbereder vi nå en full protokollartikkel med trinnvise instruksjoner. Men som forberedelse, innsending og publisering av et fullt manuskript tar betydelig tid, vil vi gjerne dele en rekke tekniske tips for STAP-cellekonverteringskultur (og relaterte eksperimenter) i Denne Protokollutvekslingen. Vi håper at disse tekniske tipsene kan svare på mange spørsmål som ofte stilles om eksperimentelle detaljer.

Nøkkelord
STAP-celler, omprogrammering, pluripotens

Related Post

Leave A Comment