Articles

alapvető technikai tippek a szomatikus sejtekből származó STAP sejtkonverziós tenyészethez

Posted by admin

a szerzők visszavonják ezt a PROTOKOLLCSERE-protokollt, mert a papírok, amelyeken alapul, visszahúzódtak.

a pluripotencia (STAP) Stimulus által kiváltott megszerzése egy celluláris átprogramozási jelenség, amelyről nemrégiben két cikk számolt be (Obokata, Nature,2014a, b). Ebben az újraprogramozási folyamatban erős külső ingerekre az újszülött szomatikus sejtek olyan sejtekké alakulnak át, amelyek pluripotenciával kapcsolatos géneket expresszálnak, mint például az Oct3/4, és képesek differenciálódni mindhárom csíraréteg származékává in vitro és in vivo. Ezek a sejtek, amelyeket STAP sejteknek neveznek, hozzájárulhatnak a kiméra magzatokhoz a blasztociszta injekció után. Ezenkívül a blastocysta injekciós vizsgálatban az injektált STAP-sejtek extraembrionális szövetekben, például placentában is megtalálhatók.

az újszülött szomatikus sejtekből származó STAP sejteket tehát teljesen átprogramozzuk pluripotencia állapotra. A STAP-sejtek létrehozásának körülményei között proliferációs képességük meglehetősen korlátozott, különbözik az embrionális őssejtektől (Esc-k). A STAP sejtek tovább alakíthatók kétféle proliferatív sejtvonallá: STAP őssejtekké és FGF4-indukált őssejtekké (FI őssejtek). A stap őssejtek, amelyek stap sejtekből alakulnak át ACTH-tartalmú táptalajban (lásd az eljárást), elveszítik az extraembrionális szövetekhez való hozzájárulás képességét. FI őssejtek, amelyek stap sejtekből származnak FGF4-tartalmú közegben, ezzel szemben megtartják azt a képességet, hogy hozzájáruljanak mind az embrionális, mind az extraembrionális vonalakhoz a blastocysta injekciós vizsgálatban, bár embrionális hozzájárulásuk viszonylag alacsony.

a külső ingerek által kiváltott STAP-jelenség új megvilágításba helyezi az emlőssejtek pluripotenciájának és differenciálódásának megértését. Ez az előre nem látható jelenség kiváltható újszülött vérképző sejtekben, például alacsony pH-értékű oldat átmeneti expozíciójával. Látszólagos egyszerűsége ellenére ez az eljárás különös gondosságot igényel a sejtkezelés és a tenyésztés körülményei, valamint a kiindulási sejtpopuláció kiválasztása során. A szubletális stressz optimális szintjének a sejtekbe juttatása elengedhetetlen a STAP sejt indukciójának folyamatához. Tapasztalataink szerint a STAP konverzió reprodukálható olyan tenyésztési körülmények között, amelyekben a legtöbb sejt egy napig életben marad az alacsony pH-értékű kezelés után, és amelyben a kezdeti sejtszám akár 80% – a később meghal a 2-3. Az oldat pH-jának ellenőrzése nem az egyetlen kulcsfontosságú tényező; a szubletális stressz késleltetett megjelenése szintén kritikusan fontos. Ezt a biológiai összefüggést számos más tényező is befolyásolhatja. Például a szomatikus sejtek előkészítését és kezelését a stressznek való kitettség előtt és után óvatosan kell végezni, mivel a sejtek további károsodása megváltoztathatja a stressz szintjét, ami túlzott sejthalált vagy elégtelen kiváltást okozhat. A STAP konverzióhoz használt sejttípusok szintén kritikusak, és más forrásokból származó sejtek használata (pl. tenyésztett fibroblasztok használata áthaladás után) szintén a STAP konverzió elérésének kudarcát eredményezheti. Reprodukálhatóan megfigyeltük a STAP sejtek átalakulását, amikor a megfelelő eljárásokat a megfelelő sorrendben követik.

a technika széles körű tesztelésének és használatának megkönnyítése érdekében most egy teljes protokollcikket készítünk lépésről lépésre. Mivel azonban a teljes kézirat elkészítése, benyújtása és közzététele jelentős időt vesz igénybe, szeretnénk megosztani számos technikai tippet a Stap sejtkonverziós kultúrához (és a kapcsolódó kísérletekhez) ebben a Protokollcserében. Reméljük, hogy ezek a technikai tippek megválaszolhatják a kísérleti részletekkel kapcsolatban gyakran feltett kérdéseket.

kulcsszavak
STAP sejtek, átprogramozás, pluripotencia

Related Post

Leave A Comment