Articles

Essential technical tips for STAP cell conversion culture from somaattis cells

Posted by admin

the AUTHORS ARE RETRACTING THIS PROTOCOL EXCHANGE PROTOCOL BECAUSE the PAPERS on which IT is BASED has been RETRACTED.

Stimulus-triggered acquisition of pluripotency (stap) on solujen uudelleenohjelmointiin liittyvä ilmiö, joka raportoitiin hiljattain kahdessa julkaisussa (Obokata, Nature,2014a, b). Tässä uudelleenohjelmointiprosessissa vastasyntyneiden somaattiset solut muuttuvat voimakkaiden ulkoisten ärsykkeiden vaikutuksesta soluiksi, jotka ilmentävät pluripotenssiin liittyviä geenejä, kuten Okt3/4: ää, ja saavat kyvyn erilaistua kaikkien kolmen itukerroksen johdannaisiksi in vitro ja In vivo. Nämä solut, joita kutsutaan STAP-soluiksi, voivat edistää kimeerisiä sikiöitä blastokystin injektion jälkeen. Lisäksi blastocystin injektiomäärityksessä pistettyjä STAP-soluja löytyy myös alkion ulkopuolisista kudoksista, kuten istukasta.

vastasyntyneiden somaattisten solujen STAP-solut ohjelmoidaan siten täysin pluripotenssitilaan. STAP-solujen perustamisedellytyksissä niiden proliferatiivinen kapasiteetti on melko rajallinen, mikä eroaa alkioiden kantasolujen (ESC) kapasiteetista. STAP-solut voidaan edelleen muuntaa kahdentyyppisiksi proliferatiivisiksi solulinjoiksi: STAP-kantasoluiksi ja FGF4-indusoiduiksi kantasoluiksi (FI-kantasoluiksi). Stap-kantasolut, jotka muuntuvat stap-soluista ACTH: ta sisältävässä väliaineessa (KS.menettely), menettävät kyvyn osallistua alkion ulkopuolisiin kudoksiin. FI-kantasolut, jotka on tuotettu stap-soluista FGF4: ää sisältävässä väliaineessa, sen sijaan säilyttävät blastokystti-injektiotestissä kyvyn osallistua sekä alkioiden että niiden ulkopuolisten sukusolujen toimintaan, vaikka niiden alkion osuus on suhteellisen pieni.

ulkoisten ärsykkeiden aiheuttama STAP-ilmiö tuo mahdollisesti uutta valoa käsitykseemme nisäkkäiden solujen pluripotenssista ja erilaistumisesta. Tämä ennalta arvaamaton ilmiö voi käynnistyä vastasyntyneiden hematopoieettisissa soluissa esimerkiksi ohimenevänä altistumisena matalan pH: n liuokselle. Näennäisestä yksinkertaisuudestaan huolimatta tämä menettely vaatii erityistä huolellisuutta solujen käsittelyssä ja viljelyolosuhteissa sekä aloitussolupopulaation valinnassa. Stap-solujen induktioprosessin kannalta on olennaista, että soluihin saadaan optimaalinen subletaalirasituksen taso. Kokemuksemme perusteella STAP-muunnos on toistettavissa viljelyolosuhteissa, joissa suurin osa soluista säilyy yhden päivän ajan matalan pH: n käsittelyn jälkeen ja joissa jopa 80% alkuperäisestä solumäärästä kuolee myöhemmin noin päivinä 2-3. Liuoksen pH: n säätely ei ole ainoa avaintekijä; myös subletaalisen stressin viivästynyt alkaminen on ratkaisevan tärkeää. Tähän biologiseen kontekstiin voivat vaikuttaa myös monet muut tekijät. Esimerkiksi somaattisten solujen valmistelu ja käsittely ennen ja jälkeen stressialtistuksen on tehtävä huolellisesti, koska lisävauriot soluissa voivat muuttaa stressitasoa aiheuttaen liiallisen solukuoleman tai riittämättömän laukaisun. STAP-muuntamisessa käytettävät solutyypit ovat myös kriittisiä, ja muista lähteistä peräisin olevien solujen käyttö (esim.viljeltyjen fibroblastien käyttö ohituksen jälkeen) voi myös johtaa stap-muuntumisen epäonnistumiseen. Olemme jäljentäneet stap-solujen muuntumista, kun oikeita menettelyjä noudatetaan oikeassa järjestyksessä.

tämän tekniikan laajan testauksen ja käytön helpottamiseksi laadimme nyt täyden protokollaartikkelin, jossa on vaiheittaiset ohjeet. Koska koko käsikirjoituksen valmistelu, toimittaminen ja julkaiseminen vie kuitenkin huomattavan paljon aikaa, haluamme jakaa tässä protokollan vaihdossa useita teknisiä vinkkejä stap-solujen muunnosviljelyyn (ja niihin liittyviin kokeisiin). Toivomme, että nämä tekniset vinkit voivat vastata moniin kysymyksiin, joita usein kysytään kokeellisista yksityiskohdista.

avainsanat
STAP-solut, uudelleenohjelmointi, pluripotenssi

Related Post

Leave A Comment